價(jià) 格：詢價(jià)
規(guī) 格：25ml/100ml/500ml/1L/5L/20L
產(chǎn) 地：中國(guó)
貨 號(hào)：HQ030302001L
品 牌：匯研生物
為確保產(chǎn)品的性能和無(wú)憂的操作，使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本手冊(cè)，有任何疑問(wèn)請(qǐng)咨詢本公司售后技術(shù)支持或當(dāng)?shù)氐匿N售人員（聯(lián)系方式見(jiàn)附錄）。
1.產(chǎn)品介紹
NHS Focurose 4FF是經(jīng)過(guò)N-羥基琥珀酰亞胺活化的快流速純化介質(zhì)，適用于偶聯(lián)蛋白質(zhì)、多肽、核酸等含有氨基的生物分子。在生物醫(yī)藥純化工藝中經(jīng)過(guò)反復(fù)的驗(yàn)證，得到了廣泛的應(yīng)用。
特點(diǎn)：
a.應(yīng)用廣泛，可適用于偶聯(lián)含氨基的抗體和小分子蛋白/多肽。
b.偶聯(lián)簡(jiǎn)單、靈活、快速、有效，能高效的維持生物分子的生物學(xué)活性及穩(wěn)定性。
c.流速快、產(chǎn)率高、易于放大。
表1：介質(zhì)性能參數(shù)
基質(zhì) | 高度交聯(lián)4%的瓊脂糖 |
粒徑范圍 | 45-165μm |
平均粒徑 | 90±5μm |
配基濃度 | 16-23μmol/ml(介質(zhì)) |
pH穩(wěn)定性* | 3-13（長(zhǎng)期） 2-13（短期） |
流速 | ≧250cm/h |
操作壓力 | ≤0.3MPa |
貯存溶液 | 100%異丙醇 |
貯存溫度 | 4-8℃ |
*：穩(wěn)定性取決于偶聯(lián)的配基
2.溶液制備
A液：0.001M HCl。
B液：0.2M NaHCO3、0.5M NaCl，pH 8.3。
C液：0.5M 乙醇胺、0.5M NaCl，pH 8.3。
D液：0.1M 乙酸鈉、0.5M NaCl，pH 4.0。
E液：O.05M Na2HPO4、0.1% NaN3，pH 7.0。
F液：2 M Glycine-HCl， pH 2.0。
G液：0.02M Na2HPO4、0.5M NaCl， pH 7.0-7.4。
H液：0.1M Glycine-HCl，pH 2.7。
I液：1.0M Tris-HCl，pH 9.0。
3.樣品制備
3.1按0.5-10mg/ml的濃度將待偶聯(lián)樣品溶解在B液中，也可以采用透析/超濾/G25將待偶聯(lián)樣品置換到B液中。
3.2樣品過(guò)濾（平均粒徑<45μm，用0.22μm過(guò)濾；45μm<平均粒徑<165μm，用0.45μm過(guò)濾；平均粒徑>165μm，用 0.8μm過(guò)濾）。
4.偶聯(lián)流程
4.1取所需量的介質(zhì)勻漿液至相應(yīng)規(guī)格的砂芯漏斗中抽干。
4.2加入2倍介質(zhì)體積的預(yù)冷A液，攪拌均勻后抽干；重復(fù)2次。
4.3將介質(zhì)轉(zhuǎn)移到相應(yīng)規(guī)格的反應(yīng)器中。
4.4將待偶聯(lián)樣品加入到反應(yīng)器中，室溫條件下溫和攪拌約2h。
4.5將介質(zhì)轉(zhuǎn)移到砂芯漏斗中抽干，保存收集容器中偶聯(lián)后的溶液。
4.6加入2倍介質(zhì)體積的C液，攪拌均勻后抽干；重復(fù)2次。
4.7將介質(zhì)轉(zhuǎn)移到相應(yīng)規(guī)格的反應(yīng)器中, 加入2倍介質(zhì)體積的C液, 室溫條件下溫和攪拌約2h。
4.8將介質(zhì)轉(zhuǎn)移到砂芯漏斗中抽干。
4.9加入2倍介質(zhì)體積的D液, 攪拌均勻后抽干。
4.10重復(fù)“4.8-4.9”2次。
4.12加入2倍介質(zhì)體積的E液, 攪拌均勻后抽干；重復(fù)2次。
4.13將介質(zhì)轉(zhuǎn)移到相應(yīng)規(guī)格的容器中，加入等體積的E液后保存?zhèn)溆谩?/span>
5.偶聯(lián)效率測(cè)定
5.1分子量＞5kDa待偶聯(lián)樣品，用G25進(jìn)行緩沖液置換，收集；分子量<5kDa待偶聯(lián)樣品，在偶聯(lián)后收集液中加入2倍體積G液混合均勻。
5.2測(cè)定偶聯(lián)前后溶液中樣品含量（A280），計(jì)算偶聯(lián)效率。
6.純化流程（以XK16/10為例）
6.1采用液滴對(duì)液滴（避免引入氣泡）的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)上。
6.2用純化水以5ml/min的流速?zèng)_洗5個(gè)CV。
6.3用G液以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。
6.4將樣品以5ml/min的流速上樣。
6.5用G液以5ml/min的流速?zèng)_洗至紫外吸收值平穩(wěn)（10-15個(gè)CV）。
6.6用H液以5ml/min的流速洗脫10CV。
6.7用純化水以5ml/min的流速?zèng)_洗5個(gè)CV。
6.8用E液以5ml/min的流速?zèng)_洗5個(gè)CV。
7.清洗（取決于待偶聯(lián)樣品的穩(wěn)定性）
7.1用6M鹽酸胍沖洗10CV，立即用純化水沖洗10CV。
7.2用70%乙醇沖洗10CV，立即用純化水沖洗10CV。
7.3用F液沖洗10CV。
8.常見(jiàn)問(wèn)題
表2：常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案
問(wèn)題 | 可能原因 | 解決方案 |
偶聯(lián)效率較低 | 1.B液鹽濃度或pH不對(duì) | 檢測(cè)B液配制是否正確 |
2.偶聯(lián)時(shí)間不夠 | 延長(zhǎng)偶聯(lián)時(shí)間 | |
3.預(yù)活化填料不合適 | 嘗試其它種類的預(yù)活化填料 | |
純化時(shí)目標(biāo)物不與介質(zhì)結(jié)合 或結(jié)合量較低 | 1.上樣量過(guò)載 | 降低上樣量 |
2.上樣流速過(guò)快 | 降低上樣流速 | |
3.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集 | 及時(shí)有效地清洗介質(zhì) | |
4.樣品在儲(chǔ)存或上樣過(guò)程中失活 | 正確儲(chǔ)存待純化樣品以維持樣品的活性 | |
5.配基和目標(biāo)物結(jié)合比例比較低 | 嘗試加大偶聯(lián)時(shí)配基濃度 | |
6.配基在偶聯(lián)或清洗過(guò)程中降解 | 檢測(cè)配基在偶聯(lián)或清洗中的穩(wěn)定性 | |
洗脫時(shí)沒(méi)有收集到目標(biāo)物 或只收集到少量目標(biāo)物 | 1.目標(biāo)物沒(méi)有與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較少 | 降低上樣流速并檢查介質(zhì)的結(jié)合能力 |
2.洗脫條件不合適 | 更改相應(yīng)洗脫條件或增強(qiáng)洗脫液的洗脫能力 | |
3.目標(biāo)物在洗脫液條件下出現(xiàn)聚集沉淀 | 檢測(cè)目標(biāo)物在洗脫液條件（鹽濃度和pH等）下的穩(wěn)定性 | |
目標(biāo)物純度較低
| 1.樣品沒(méi)有經(jīng)過(guò)前處理 | 樣品上柱前必須要經(jīng)過(guò)離心或過(guò)濾 |
2.樣品粘度過(guò)高 | 用平衡液適當(dāng)?shù)南♂寴悠?，降低粘度?/span> | |
3.洗雜不徹底 | 加大洗雜體積直至基線平穩(wěn)并與平衡液一致 | |
4.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集沉淀 | 及時(shí)有效地清洗介質(zhì) | |
5.洗脫條件不佳，洗脫速度太快、梯度太陡。 | 調(diào)整洗脫條件 | |
6.目標(biāo)物出現(xiàn)降解 | 檢測(cè)目標(biāo)物的穩(wěn)定性 | |
7.柱料裝填效果不佳 | 重新裝填或購(gòu)買 | |
8.雜質(zhì)出現(xiàn)非特異性吸附 | 適當(dāng)選擇添加劑降低非特異性吸附 | |
9.分離柱頂部有較大儲(chǔ)樣體積 | 重新裝柱或降低儲(chǔ)樣體積 | |
10.介質(zhì)中有微生物生長(zhǎng) | 介質(zhì)使用完后，請(qǐng)及時(shí)正確保存介質(zhì) | |
介質(zhì)載量下降 | 1.上樣流速過(guò)快 | 降低上樣流速 |
2.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集，導(dǎo)致載量下降。 | 及時(shí)清洗介質(zhì) | |
3.使用次數(shù)過(guò)多，配基出現(xiàn)脫落 | 重新偶聯(lián)新的介質(zhì) | |
4.樣品在儲(chǔ)存或上樣過(guò)程中失活，不能較好的與配基結(jié)合 | 正確儲(chǔ)存待純化樣品以維持樣品的活性 | |
色譜峰上升過(guò)陡 | 介質(zhì)裝填過(guò)緊 | 重新裝柱 |
色譜峰上升過(guò)緩或拖尾 | 介質(zhì)裝填太松 | 重新裝柱 |
柱床有裂縫或干涸 | 出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入 | 檢查管路是否有泄露或氣泡，重新裝柱 |
液流較慢
| 1.蛋白或脂類聚集 | 及時(shí)清洗介質(zhì)或?yàn)V膜 |
2.蛋白沉淀在介質(zhì)中 | 調(diào)整平衡液和洗脫液組分，以維持目標(biāo)物的穩(wěn)定性和介質(zhì)的結(jié)合效率 | |
3.分離柱中微生物生長(zhǎng) | 所用試劑必須經(jīng)過(guò)過(guò)濾和脫氣； 樣品上柱前必須離心或過(guò)濾 |
9.訂購(gòu)信息
表3：訂購(gòu)信息表
產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
NHS Focurose 4FF | 25ml | HQ030302025M |
NHS Focurose 4FF | 100ml | HQ030302100M |
NHS Focurose 4FF | 500ml | HQ030302500M |
NHS Focurose 4FF | 1L | HQ030302001L |
NHS Focurose 4FF | 5L | HQ030302005L |
NHS Focurose 4FF | 20L | HQ030302020L |
備注：大規(guī)格包裝產(chǎn)品或其它產(chǎn)品購(gòu)買，請(qǐng)咨詢本公司當(dāng)?shù)劁N售或售前技術(shù)支持。
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